Lymphocyte proliferative responses in dairy cows supplemented with an immunomodulatory feed additive and administered polyvalent vaccination / [Proliferação de linfócitos em vacas leiteiras suplementadas com um aditivo alimentar imunomodulador e vacinadas com vacina polivalente]

O presente estudo avaliou o efeito da suplementação com OmniGen-AF® na proliferação de linfócitos e títulos de anticorpos após vacinação em bovinos leiteiros. Amostras de sangue periférico foram coletadas de 32 vacas leiteiras para quantificação dos títulos de anticorpos anti-Leptospira, e amostras de sangue periférico de 16 vacas leiteiras foram também coletadas para avaliação da proliferação de linfócitos. Observou-se que a suplementação com OmniGen-AF® aumentou a proliferação basal de linfócitos (sem estímulos) 21 dias após a vacinação (P=0,03), apesar de reduzir a proliferação de linfócitos B quando estimulada com Leptospira borgpetersenii serovar Hardjo inativada pelo calor (P=0,03). Ademais, nenhum efeito da suplementação sobre a proliferação de linfócitos no momento imediatamente anterior à vacinação e nos títulos de anticorpos anti-Leptospira foi encontrado. Além disso, a proliferação de linfócitos estimulada com lipopolissacarídeos foi maior em vacas multíparas que em primíparas 21 dias após a vacinação (P=0,03). Desse modo, o presente estudo demonstra que a suplementação com OmniGen-AF® não afetou de forma robusta a proliferação de linfócitos e os títulos de anticorpos anti-Leptospira após vacinação em vacas leiteiras sadias.(AU)

Inhibition of the growth of major mastitis-causing pathogens by non-aureus Staphylococcus isolates using the cross-streaking method / Comunicação: Inibição do crescimento dos principais patógenos causadores de mastite por isolados de estafilococos não aureus pelo método cross-streaking

O objetivo do presente estudo foi avaliar a capacidade de estafilococos não aureus (NAS) isolados de diferentes nichos ecológicos (leite, ambiente e ápice do teto), associados a vacas leiteiras, de inibir os principais agentes etiológicos da mastite bovina (Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Streptococcus uberis e Escherichia coli). Neste estudo, 38 isolados NAS de diferentes nichos ecológicos foram avaliados quanto à capacidade de inibir o crescimento in vitro de importantes patógenos causadores de mastite pelo método cross-streaking. No total, 19 (50%) isolados de NAS (oito isolados de S. chromogenes, 10 de S. fleurettii e um de S. haemolyticus) apresentaram inibição contra os principais patógenos causadores de mastite. No entanto, a inibição dos patógenos causadores da mastite bovina por isolados de NAS foi maior contra bactérias Gram-positivas. Além disso, o presente estudo não sugeriu que os nichos ecológicos influenciam a capacidade do NAS de inibir os principais patógenos causadores da mastite bovina. Com base nesses resultados, concluiu-se que certos isolados de NAS apresentam potencial efeito protetor contra os principais patógenos da mastite, pelo menos in vitro.(AU)

Perfil de imunoglobulinas, cura clínica e bacteriológica após diferentes tratamentos para a mastite clínica bovina / Profile of immunoglobulins, clinical and bacteriological cure after different treatment routes of clinical bovine mastitis

O presente estudo objetivou avaliar o perfil das Ig durante os diferentes tratamentos de vacas com mastite clínica. Para isso, 30 vacas com mastite clínica em um quarto mamário foram utilizadas e divididas em três grupos. O primeiro grupo foi composto por 10 animais submetidos ao tratamento combinado com infusão intramamária de 8,5mg de sulfato de cefquinoma após cada ordenha, totalizando três aplicações e administração intramuscular de 2,5mg/kg de enrofloxacina por três dias. O segundo grupo foi composto por 10 animais submetidos ao tratamento intramamário, com infusão intramamária de 8,5mg de sulfato de cefquinoma, após cada ordenha, totalizando três aplicações. O terceiro grupo foi composto por 10 animais submetidos ao tratamento sistêmico, com 2,5mg/kg de enrofloxacina, durante três dias. As amostras de leite foram coletadas de todos os animais antes dos tratamentos (momento 0), no segundo (momento 1), no quinto (momento 2) e no 12º dia (momento 3) após o término dos tratamentos. Estas foram submetidas à contagem de células somáticas, ao California Mastitis Test (CMT), ao exame bacteriológico e à quantificação das IgG1, IgG2, IgA e IgM. O tratamento combinado foi mais eficaz e precoce na taxa de cura clínica, na redução dos escores de CMT e da contagem de células somáticas. Além disso, os resultados do presente estudo demonstraram que as concentrações lácteas das diferentes classes de Ig, apesar de sua importância biológica, não estão relacionadas ao prognóstico da mastite clínica bovina, ou seja, não podem ser consideradas marcadores robustos associados à cura clínica e/ou bacteriológica da infecção intramamária.(AU)

The present study aimed to evaluate the profile of immunoglobins profile, clinical and bacteriological cure after different treatment routes of clinical bovine mastitis. Here, 30 Holstein cows with clinical mastitis in one quarter were uniformly divided into: 10 dairy cows that received 8.5mg of cefquinome sulphate administrated intramammarily during three consecutive milkings and 2.5mg/kg of enrofloxacin administrated parenterally during three consecutive days (Group 1); 10 dairy cows that received 8.5mg of cefquinome sulphate administrated intramammarily during three consecutive milkings (Group 2); and 10 dairy cows that received 2.5mg/kg of enrofloxacin administrated parenterally during three consecutive days (Group 3). Milk samples for somatic cell count, California Mastitis Test (CMT), bacteriological culture and quantification of IgG1, IgG2, IgM and IgA were collected before antimicrobial treatment, and after two, five and 12 days after the antimicrobial treatment. The combined treatment was more effective in the clinical cure rate, reduction of somatic cell count and CMT scores. Furthermore, the results demonstrated that milk concentration of different Igs classes were not related to prognosis of bovine clinical mastitis, and then cannot be considered as robust markers associated with clinical and bacteriological cures.(AU)

Influence of orchiectomy of seven month old bulls on bronchoalveolar immune function / Influência da orquiectomia na função imune broncoalveolar de garrotes de sete meses de idade

The present study evaluated the impact that orchiectomy, a routine but painful intervention in bovine husbandry, can cause on pulmonary immunity. To identify whether orchiectomy can impair lung defense, analyses of serum cortisol concentration and of alveolar macrophage and their function (phagocytosis and respiratory burst) were evaluated. Sixteen Holstein bulls (7 mo old, 250±50kg of body weight BW) were divided in two homogeneous groups - the castrated group and the sham group - and the sample were collected on Days -7, 1 and 7 relative to the day of the procedure. Serum cortisol concentration statistically increased on Days 1 and 7 (D-7: 4,97±1,28ng/ml; D1: 6,35 ±1,10ng/ml; D7: 8,28±1,94ng/ml) after castration and these variables seem to impact the alveolar macrophage percentage on D1 (D-7: 76,86±3,44%; D1: 60,92±2,44%; D7: 74,17±2,56%) and their respective function of phagocytosis (P) and the oxidative burst (OB) on Days 1 and 7 for the castrated group (P D-7: 56,25±15,63 arbitrary values; D1: 54,75±14,07 arbitrary values; D7: 31,77±8,44 arbitrary values; and OB D-7: 222,34±39,52 arbitrary values; D1: 135,25±37,68 arbitrary values; D7: 117,73±18,17 arbitrary values). These results indicate that surgical castration affected lung defense until seven days after the practice, so the pulmonary cell function was impaired for a period higher than that reported in the literature.(AU)

O presente estudo avaliou o impacto que a orquiectomia, uma intervenção dolorosa comumente realizada durante a criação de bovinos, pode causar na imunidade pulmonar. Para tanto, foram realizadas dosagens de cortisol sérico, bem como a análise de macrófagos alveolares e suas funções (fagocitose e metabolismo oxidativo) de 16 bovinos da raça Holandesa preto e branco (sete meses de idade, 250±50kg de peso vivo). Esses animais foram divididos aleatoriamente em dois grupos homogêneos - grupo castrado e grupo controle - e foram avaliados nos dias -7, 1 e 7, relativos ao dia do procedimento cirúrgico, que foi realizado no dia 0. A concentração de cortisol sérico aumentou estatisticamente nos dias 1 e 7 em relação ao grupo controle (D-7: 4,97±1,28ng/mL; D1: 6,35 ±1,10ng/mL; D7: 8,28±1,94ng/mL). Notou-se diminuição de macrófagos alveolares no D1 (D-7: 76,86±3,44%; D1: 60,92±2,44%; D7: 74,17±2,56%) e de suas funções de fagocitose (F) e metabolismo oxidativo (MO) nos dias 1 e 7 (F D-7: 56,25±15,63 valores arbitrários; D1: 54,75±14,07 valores arbitrários; D7: 31,77±8,44 valores arbitrários; e MO D-7: 222,34±39,52 valores arbitrários; D1: 135,25±37,68 valores arbitrários, D7: 117,73±18,17 valores arbitrários) para o grupo castrado. Esses resultados demonstram que a orquiectomia afeta as defesas pulmonares por até sete dias após a prática, período superior ao relatado pela literatura.(AU)

Correlação entre a contagem automática de células somáticas e a porcentagem de neutrófilos pela citometria de fluxo e pela técnica de citocentrifugação / Correlation between automatic somatic cell count and the percentage of neutrophils through flow cytometry and cytocentrifugation technique

O objetivo do presente estudo foi avaliar a correlação entre a contagem automática de células somáticas (CCS) com a porcentagem de neutrófilos pela técnica de citocentrifugação e pela citometria de fluxo. Para tal, 102 amostras de leite proveniente de 28 vacas da raça Holandesa foram coletadas e submetidas ao isolamento de células do leite e posterior identificação da população de neutrófilos. Após citocentrifugação, os neutrófilos foram identificados por microscopia óptica utilizando-se o corante de Rosenfeld. Os neutrófilos lácteos foram identificados por citometria de fluxo utilizando anticorpo monoclonal específico (CH138A) e anticorpo monoclonal secundário conjugado à ficoeritrina. O presente estudo demonstrou correlação positiva entre a CCS e a porcentagem de neutrófilos por citometria de fluxo (r= 0,625) e pela técnica de citocentrifugação (r= 0,267). Observou-se também correlação positiva entre a porcentagem de neutrófilos pela citometria de fluxo e pela técnica de citocentrifugação (r = 0,496), embora a porcentagem de neutrófilos no leite tenha sido maior pela técnica de citocentrifugação quando comparada com a citometria de fluxo. Deste modo, o presente estudo indica que a citometria de fluxo pode ser uma ferramenta útil no diagnóstico e controle da mastite bovina.

The purpose of the present study was to assess the correlation between the automatic somatic cell count (SCC) and the percentage of neutrophils through cytocentrifugation technique and flow cytometry. Thus, 102 milk samples from 28 Holstein dairy cows were collected and submitted to milk cell isolation procedures, and afterwards, the neutrophils were identified. After cytocentrigugation, the neutrophils were microscopically identified using the rosenfeld dye. The milk neutrophils were recognized by flow cytometry using primary mouse IgM monoclonal antibody (CH138A) and phycoerytrin (PE) goat anti-mouse IgM antibody. This study found a positive correlation between SCC and the percentage of neutrophils through cytocentrifugation (r= 0.267) and flow cytometry (r= 0.625). A positive correlation was also encountered between the percentage of neutrophils through cytocentrifugation and flow cytometry (r= 0.496), although the percentage of neutrophils was higher in samples submitted to cytocentrifugation. In conclusion, flow cytometry can be a useful tool in the diagnosis and control of mastitis.

Lactation stage and udder health status of Santa Ines ewes / Estágio da lactação e saúde da glândula mamária em ovelhas da raça Santa Inês

Avaliou-se o risco de infecção em diferentes fases da lactação em 33 ovelhas da raça Santa Inês. Inicialmente a glândula foi submetida ao exame físico e à prova de fundo escuro. Posteriormente, amostras de leite foram coletadas assepticamente para a realização de exame bacteriológico - California Mastitis teste -, e contagens microscópica e automática de células somáticas. Nenhuma diferença foi observada entre as distintas fases de lactação. Observou-se alta persistência de infecções intramamárias, e tendência a maior contagem de células somáticas no último período de lactação, que pode ser oriunda da maior resistência a infecções neste período.

Dinâmica da celularidade do colostro de vacas da raça Holandesa no pós-parto imediato / Cell dynamics of Holstein cow colostrum immediately after parturition

Avaliou-se a celularidade do colostro de 53 vacas da raça Holandesa, utilizando-se 171 amostras, colhidas após a primeira e a segunda ordenha pós-parto. Para a análise citológica quantitativa e qualitativa, foram utilizadas as técnicas de microscopia direta e citocentrifugação. O total de leucócitos obtido por contagem microscópica direta foi de 0,878x10(6) e 1,260x10(6), antes da primeira e da segunda ordenha, respectivamente, e os valores da mediana dos fagócitos obtidos antes da primeira e da segunda ordenha foram de 0,657 e 0,828x10(6) leucócitos mononucleares, e 0,178 e 0,392x10(6) leucócitos polimorfonucleares (P<0,0001). Os valores da mediana dos tipos leucocitários, antes da primeira e da segunda ordenha, foram: 0,640x10(6) e 0,772 monócitos/células epiteliais; 0,136x10(6) e 0,098 linfócitos; 0,045x10(6) e 0,203x10(6) neutrófilos, respectivamente. Concluiu-se que o colostro bovino da segunda ordenha apresentou aumento da quantidade de células somáticas e leucócitos polimorfonucleares/mL de colostro. Essas variações podem estar relacionadas à importância do colostro aos neonatos, ou a modificações fisiológicas e de defesa da glândula mamária, durante o período de adaptação dela.

Colostrum cellularity was studied in 53 Holstein cows using 171 samples, collected before the first and second postpartum milking. Direct microscopic counts and cytocentrifugation were used in the quantitative and qualitative cytological analyses. The total number of leukocytes obtained by means of direct microscopic count was equal to 0.878 x 10(6) and 1,260 x 10(6) , before the first and second milking, respectively. The median of phagocyte counts before the first and second milking were, respectively,0.657 and 0.828 x 10(6) mononuclear leukocytes, and 0.178 and 0.392 x 10(6) polymorphonuclear leukocytes (P<0.0001). The median of leukocyte counts, before the first and second milking were, respectively, 0.640 x 10(6) and 0.772 monocytes/epithelial cells; 0.136 x 10(6) and 0.098 lymphocytes; 0.045 x 10(6) and 0.203 x 10(6) neutrophils. It was concluded that bovine colostrum of the second milking showed an increase in the number of somatic cells and polymorphonuclear leukocytes and polymorphonuclear leukocytes/mL. This variation may be either related to the importance of colostrum to neonates, or to physiological and defense changes that occur in the mammary gland during immediate after postpartum.

Proliferação de linfócitos e apoptose de células CD5+ de bovinos infectados pelo vírus da leucose enzoótica bovina / Apoptosis of CD5+ cells and lymphocyte proliferation in bovine leukemia virus-infected dairy cows

Avaliaram-se a proliferação de linfócitos e a apoptose de células CD5+ de bovinos naturalmente infectados pelo vírus da leucose enzoótica bovina. Para tal, 100 vacas da raça Holandesa, em lactação, foram triadas quanto ao sorodiagnóstico para a leucose enzoótica bovina e o perfil hematológico, e 15 foram escolhidos e distribuídos uniformemente entre os três grupos, a saber: animais negativos, animais positivos alinfocitóticos e animais positivos e que manifestaram linfocitose persistente (LP). Para a avaliação da proliferação de linfócitos, procedeu-se ao isolamento das células mononucleares por gradiente de centrifugação, em que 2x10(6) linfócitos por mL foram plaqueados por poço e analisados por citometria de fluxo utilizando-se o fluorocromo CFSE-DA. A apoptose do sangue periférico deu-se utilizando a anexina V-FITC, e para a identificação das células CD5+, utilizaram-se anticorpos monoclonais. Ocorreu menor proliferação de linfócitos nos animais infectados e que manifestavam LP, e menor apoptose de células CD5+ do sangue periférico. Pode-se sugerir que o desenvolvimento da LP, resultante do aumento de linfócitos B, deve-se à redução do processo apoptótico das células CD5+, principal população infectada, e que a maior proliferação linfocitária pode se restringir apenas ao estádio inicial do desenvolvimento da LP.

The purpose of the present trail was to evaluate the lymphocyte proliferation and the apoptosis rates of CD5+ cells in dairy cows infected with bovine leukemia virus (BLV) with distinct lymphocyte profiles in infected animals known as alymphocytotic (AL) and persistent lymphocytosis (PL). A total of 100 Holstein cows were sera tested for bovine leukemia virus through agar gel immunodiffusion (AGID) and enzyme-linked immunosorbent-assay (ELISA). From these animals, 15 cows were selected and divided uniformly in 3 groups (negative, AL, LP). The lymphocyte proliferation was performed using flow cytometric measurement of CFSE-DA dye, where 2x10(6)/mL lymphocytes were plated per well. The apoptosis of CD5+ cells from peripheral blood was performed using the annexin V-FITC to measure the apoptosis rates and the identification of CD5+ was accessed using monoclonal antibodies. Animals from the LP group showed lower lymphocyte proliferation and also lower apoptosis rates of CD5+ cells compared with negative and AL animals. The development of PL which resulted from an increase in B cell count, is due to the decrease in the apoptosis rates of CD5+ cells, and the higher lymphocyte proliferation appears to be limited only in the initial stages of development of LP.

Avaliação funcional de monócitos de bovinos naturalmente infectados pelo vírus da leucose bovina / Functional evaluation of monocytes in cattle naturally infected with the bovine leucosis virus

Para a avaliação funcional de monócitos de bovinos infectados pelo vírus da leucose enzoótica bovina (LEB), foram coletadas amostras de sangue de 10 vacas com sorodiagnóstico negativo (SN), 10 com sorodiagnóstico positivo e que manifestavam linfocitose persistente (LP), e 10 com sorodiagnóstico positivo alinfocitóticas (AL). Os monócitos foram separados por gradiente de densidade e aderência em placa, submetidos aos testes de viabilidade por exclusão do azul de tripan, fagocitose de partículas de Zymosan, espraiamento em lamínula de vidro e quantificação da liberação de peróxido de hidrogênio (H2O2) e de óxido nítrico (ON). Monócitos de animais com LP apresentaram os menores índices de viabilidade (P<0,001), de fagocitose (P<0,001) e de espraiamento (P=0,006). Também apresentaram maior produção de H2O2 sem prévio estímulo (P=0,001) e após estímulo in vitro com 12-miristato 13-acetato de forbol (P=0,006) do que monócitos de animais SN e AL. O aumento da produção de H2O2 proporcionado pelo estímulo foi menor (P=0,015) nos monócitos de fêmeas que manifestaram LP. Não houve diferença na produção de ON pelos monócitos segundo os grupos. Os resultados indicam que o vírus da LEB, apesar de infectar linfócitos B, altera funcionalmente os monócitos circulantes em bovinos que manifestam LP.

Assuming that the bovine leukosis virus (BLV) alters quantitatively and qualitatively bovine circulating leukocyte subpopulations, thus influencing the innate immune response, monocytes function in BLV-infected cattle was assessed. Peripheral blood was obtained from 10 BLV-negative cows (SN), 10 naturally BLV-infected, non-lymphocytotic cows (AL), and 10 BLV-infected cows with persistent lymphocytosis (PL). Monocytes were isolated by density gradient and adherence to plates. Cells were submitted to Trypan Blue dye exclusion viability assay, phagocytosis of Zymosan and cell-spreading assays, and quantification of hydrogen peroxide (H2O2) and nitric oxide (NO) production. Monocytes from cattle with PL had the lowest viability (P<0.001), phagocytosis of Zymosan particles (P<0.001), and spreading (P=0.006) rates. Additionally, monocytes from cows with PL had the highest production of H2O2 , with no prior stimulus (P=0.001), and after in vitro stimulus with phorbol 12-myristate 13-acetate (P=0.006). Nonetheless, the boost in H 2 O 2 production, provided by in vitro stimulus, observed in monocytes from cows with PL was lower (P=0.015) than that observed in monocytes from SN and AL cattle. There was no difference in NO production among groups. Results show that BLV, despite infecting B lymphocytes, alters innate immune functions of monocytes isolated from BLV-infected cows expressing PL.

Antimicrobial susceptibility of coagulase-negative staphylococci isolated from meat-producing ewes with mastitis / Susceptibilidade antimicrobiana de cepas de estafilococcos coagulase-negativa isolados de ovinos de corte com mastite

Avaliou-se a sensibilidade antimicrobiana in vitro de 121 cepas de estafilococos coagulase-negativa isolada de leite de ovelhas Santa Inês, aos fármacos: penicilina, amoxicilina, ampicilina, estreptomicina, oxaciclina, neomicina, cefalotina, gentamicina e sulfonamida. A resistência à sulfonamida foi a mais frequente (27,3 por cento), seguida pela estreptomicina (14,0 por cento) e pela oxaciclina (14,0 por cento), enquanto da gentamicina (1,6 por cento) foi a menos frequente. Todas as cepas foram sensíveis a pelo menos um antimicrobiano, e 20,3 por cento das cepas apresentaram resistência múltipla. Os resultados mostram a importância de Staphylococci coagulase-negativas como agentes causadores de mastite em ovinos, e o perfil de resistência múltipla indica a importância da determinação da resistência à oxaciclina como indicador da presença de ilhas de patogenicidade que contêm fatores de virulência e resistência a outros antimicrobianos que contribuem para a sobrevivência da bactéria ao tratamento.

Evaluation of alveolar macrophage function after experimental infection with equine herpesvirus-1 in horses

The role of the pulmonary alveolar macrophages (PAM) in the lung defense mechanism was evaluated in horses infected with equine hespesvirus-1 (EHV-1). Five adult horses were exposed to 10(6.6) TCID50 EHV-1 by intranasal instillation. Cytology of bronchoalveolar lavage (BAL) was performed using cytocentrifugation of samples and slides stained by Rosenfeld. Cell concentration was adjusted to 2´10(6) cells/ml, for the measurement of macrophage activity - spreading, phagocytosis of zymosan particles and release of hydrogen peroxide (H2O2). All animals were positive in virus isolation on the second, third and fifth days post-inoculation (DPI). Seroconversion was observed on the 14th DPI. Lymphocytosis was observed by BAL cytology on the 16th DPI. Measurement of macrophage activity demonstrated a marked increase in the spreading rate, on the 23rd and 30th DPI. Phagocytosis was decreased on the second DPI, and returned to levels similar to those observed before inoculation on the 23rd DPI. The amount of H2O2 released by PAM declined on day 2, but, by day 16, they returned to values similar to those observed before inoculation. The decline in PAM activity in the acute phase of disease is indirect evidence that these cells have an important role in lung defense mechanisms against this agent.